Метод лабораторной диагностики хламидиоза — Хламидиоз

Сравнительная характеристика анализов

Роль лабораторных анализов на хламидии заключаются не только в их выявлении, но и в следующих мероприятиях:

  • выявление чувствительности патогенных микроорганизмов к фармакологическим препаратам (антибиотикам);
  • выявления стадии течения хламидийной инфекции;
  • часто выявляемый персистирующий хламидиоз, трудно поддающийся лечению при снижении иммунитета;
  • установление последствий, спровоцированных инфекцией.

Методы лабораторной диагностики хламидиоза в сравнении по цене и достоверности.

Для установления видовой принадлежности инфекционных возбудителей практикуется использование экспресс-тестирования, реакции иммунной флюоресценции, иммуноферментных анализов.

Лабораторная диагностика урогенитального хламидиоза

Возбудителем урогенитального хламидиоза – инфекции, вызывающей уретриты, цервициты, сальпингиты, эпидидимиты и конъюнктивиты, является Chlamydia trachomatis.

Материалом для исследования при хламидиозе являются мазки со слизистой оболочки мочеиспускательного канала, выделения из шейки матки, соскобы, мазки-отпечатки и др.

Микроскопический метод исследования мазков из исследуемого материала в окраске по методу Романовского-Гимзе в настоящее время практически не применяется.

Метод лабораторной диагностики хламидиоза - Хламидиоз

Распростра­ненными методами исследования при хламидиозе являются прямая и непрямая, в основе которых лежит обработка мазков специфическими флюоресцирующими антите­лами антителами против хламидий (прямая РИФ), либо обработка мазка нелюминесцирующими антите­лами против хламидий, а затем антивидовой люминесцирующей сывороткой (непрямая РИФ).

При иссле­довании препаратов в люминесцентный микроскоп антигены хламидий обнаруживаются в цито­плазме клеток в виде единичных ярко-зеленых элементарных или ретикулярных телец (рис. 27 ).

Культуральный метод. Выделение хламидий осуществляется путем заражения исследуемым материалом культур клеток McCoy, HeLa и других линий. Через 48 часов культивирования в термостате при 37 0 С выявляют включения возбудителя в клетках иммунофлюоресцентным методом.

Выделение хламидий в культуре клеток имеет важное диагностическое значение, по­зволяет выявить жизнеспособные хламидии и определить их чувствительность к антимикробным препаратам.

Генодиагностика.Разработана ПЦР для определения специфических фрагментов ДНК хламидий.

Серологический методвключает постановку РСК, РНГА и ИФА для определения антител различных классов (IgG, IgM, IgA) к хламидиям в сыворотке крови больных с подозрением на хламидиоз.

С учетом низкой иммуногенности хламидий и возможности наличия специфических антител после перенесенной ранее хламидиозной инфекции рекомендуется исследование нескольких проб сыворотки крови в динамике заболевания с интервалом в 2-3 недели.

Метод лабораторной диагностики хламидиоза - Хламидиоз

Тест-системы для ИФА дают возможность дифференцировать различные классы антител к хламидиям. При остром процессе в крови чаще выявляются антитела IgM, а также быстро нарастающие или быстро снижающиеся антитела IgG и IgA.

При хронически протекающем хламидиозе чаще определяются стабильные концентрации антител IgG и IgA, титры которых снижаются в ходе эффективно проводимой терапии.

Рис. 27. Элементарные и ретикулярные тельца Chlamydia trachomatisв мазках со слизистой оболочки уретры. Прямая РИФ. х630

Иммуноферментное исследование

К одному из самых точных способов исследования хламидиоза относится иммуноферментный анализ. С помощью этого метода выявляются не сами патогенные микроорганизмы, а антитела, продуцируемые иммунной системой в ответ на проникновение чужеродных белков в кровеносное русло и слизистые оболочки влагалища или мочеиспускательного канала.

Рассмотрим антитела, которые выделяют в процессе диагностики:

  • IgM — Данные антитела появляются в самом начале заболевания, через 5 дней после заражения. Их наличие в крови говорит об остром течении инфекционного процесса. В самом начале заболевания их максимум, потом идет постепенное их снижение, через месяц они единичные, а потом полностью исчезают.
  • IgA — Они появляются через 7-10 дней после заражения хламидиозом. Данные антитела говорят о том, что инфекция закрепилась в организме. В этот период человек наиболее заразен. Уменьшение IgA наблюдается через 3-4 месяца.
  • IgG — эти белки образуются в крови через 2-3 недели от начала инфицирования. Они постоянно присутствуют в крови больного человека, независимо от того болен он или уже прошел успешное лечение. Тип G часто говорит о том, что человек в прошлом перенес инфекцию.

Лабораторная диагностика хламидийной инфекции

Метод лабораторной диагностики хламидиоза - Хламидиоз

… по разным данным, от 5 до 15 % молодых сексуально активных людей поражены хламидийной инфекцией.

ВВЕДЕНИЕ

Хламидии ( Chlamydia ) — мелкие грамотрицательные кокковидные бактерии размером 250-1500 нм (0,25-1 мкм). Они имеют все основные признаки бактерий: содержат два типа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), рибосомы, мурамовую кислоту (компонент клеточной стенки грамотрицательных бактерий), размножаются бинарным делением и чувствительны к некоторым антибиотикам.

Семейство Chlamydiaceae (входящее в порядок Chlamydiales ) является облигатными внутриклеточными бактериями, которые имеют две формы жизни (элементарные и ретикулярные тельца), сходный двухфазный цикл развития (состоящий из чередования различных форм — элементарного тельца и ретикулярного тельца), обладают склонностью к персистенции (или к латентному (скрытому) существованию).

Согласно новой международной классификации имеется четыре семейства и 5 родов хламидий. В каждом роде представлено от одного до шести видов, отличающихся между собой по ряду фенотипических признаков.

Рассмотрим наиболее значимые (патогенные) для человека виды хламидий (не погружаясь в эту тонкую и сложную классификацию). (1) Chlamydia psittaci : вызывает у человека атипичную пневмонию, энцефаломиокардит, артрит, пиелонефрит, энцефаломиокардит (эта хламидия является абсолютным зоонозом, то есть, инфекция передается человеку от животного;

встречается только у человека и вызывает широчайший спектр болезней, включая урогенитальные заболевания, конъюнктивиты, некоторые формы артритов (серотипы хламидий, вызывающие поражение урогенитального тракта передаются от человека к человеку при половом контакте).

Особенностью хламидий является то, что они развиваются только в эпителии особого типа, в так называемом призматическом (цилиндрическом) эпителии, поэтому поражаются органы, покрытые этим эпителием.

ПОДРОБНЕЕ ПРО:  Высокотехнологичные методы лечения рака

Chlamydia pneumonia и Chlamydia psittaci, поражая эпителий дыхательных путей, прежде всего бронхов, вызывают хронические, реже острые, бронхиты и пневмонии («воспаление лёгких»).

Chlamydia trachomatis же, повреждая слизистую оболочку уретры, канала шейки матки, маточных труб приводит не только к острым воспалительным процессам, но и к хронизации с последующими осложнениями, наиболее грозным из которых является бесплодие

Многочисленные клинико-эпидемиологические исследования свидетельствуют о широком распространении хламидийной инфекции. Сегодня хламидийная инфекция прочно заняла второе место после пневмококка в спектре возбудителей пневмоний, которые нередко имеют тенденцию к хронизации и тяжелому течению с летальными исходами.

50–80% случаев нарушения репродуктивной функции у женщин обусловлены инфекционными поражениями, среди которых хламидийные встречаются наиболее часто.

Клиническую диагностику хламидиоза затрудняют длительное бессимптомное течение, нехарактерные клинические проявления, неэффективность иммунохимических и серологических методов анализа, дороговизна, длительность и трудоемкость микробиологического метода.

ТЕХНИКА ВЗЯТИЯ МАТЕРИАЛА

Прежде чем рассматривать методы лабораторной диагностики хламидийной инфекции, необходимо рассмотреть технику взятия материала, поскольку данная процедура входит один из самых ответственных этапов диагностики хламидиоза – этап забора материала.

При исследовании на хламидии методом заражения культуры клеток перед взятием материала больные не должны принимать в течение месяца антибиотики тетрациклинового ряда;

при цитологической методике, в том числе и при использовании моноклональных флюоресцирующих антител, антибиотики не следует применять за две недели до исследования.

При взятии материала на хламидии следует помнить, что оптимальным для присутствия и размножения хламидий являются определенные участки цилиндрического эпителия мочеполовых путей (передняя уретра на глубине 2,5-4 cм у мужчин, слизистая оболочка цервикального канала матки на глубине 1,5 см у женщин).

При взятии материала из шейки матки ключевым моментом является удаление слизистой пробки. От тщательности проведения этой подготовительной процедуры во многом зависит правильность соскоба клеток цервикального канала.

Слизистую пробку удаляют ватным тампоном и пинцетом, а затем берут материал специальной щеточкой cervex brush или voba-brush, имеющей ряд преимуществ, так как для получения репрезентативного результата важно присутствие в образце клеток со всей поверхности цервикального канала, зоны трансформации.

Забор материала у девочек производится со слизистой оболочки преддверия влагалища, в отдельных случаях — из заднего свода влагалища через гименальные кольца.

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

Цитоскопические методы. При цитоскопическом методе одновременно с поиском цитоплазматических клеток-включений Гальбершедтера-Провачека учитывается количество лейкоцитов как показателя воспаления, а также дополнительная информация о наличии сопутствующей бактериальной микрофлоры, дрожжеподобных грибов, трихомонад и т.п.

Цитоскопический метод широко доступен, но эффективен лишь при острых формах инфекции, значительно менее эффективен и информативен при хронических формах заболевания.

Иммуноморфологические методы. Эти методы основаны на обнаружении антигенных субстанций хламидий в эпителии и других тканях путем обработки препаратов антителами.

Антитела диагностической антихламидийной сыворотки соединены с какой-либо меткой — люминесцирующей (ФИТЦ-антитела) или ферментной (энзим-меченые антитела).

Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ). Этот метод предусматривает прямое выявление антигенов хламидий. При люминесцентной микроскопии хламидийные включения определяются в виде образований в клетке эпителия с зеленой или желто-зеленой флюоресценцией на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток.

Включения могут иметь зернистую, гомогенную или смешанную структуру. Диагностическая информативность ПИФ связана с тем, что с ее помощью выявляются не только корпускулярные, но и растворимые антигены хламидий.

Непрямой метод иммунофлюоресценции. Непрямой метод иммунофлюоресценции применяют в тех случаях, когда нет в наличии ФИТЦ-конъюгата антихламидийных антител.

В этих случаях приготовленный тем же методом, что и для ПИФ препарат из клинических проб обрабатывают вначале антихламидийными антителами, полученными путем иммунизации хламидиями овец, кроликов, мышей или других животных, а затем второй сывороткой, специфичной для вида животного, которое было иммунизировано хламидиями. Антитела второй сыворотки конъюгированы с ФИТЦ.

Диагностика хламидиоза

Методы иммуноферментного анализа. Эти методы основаны на обнаружении растворимого антигена хламидий в исследуемых пробах. Чаще всего в клинической практике применяются наборы реагентов, основанные на методе твердофазного ИФА-анализа для определения антигенов хламидий.

Твердая фаза покрыта хламидийными моноклональными антителами установленной специфичности. Амплификация достигается с использованием технологии полимерной конъюгации, в результате чего происходит фиксация, при которой на каждый связанный участок антигена приходится полимерный комплекс с высокомолекулярным фрагментом.

Кроме того, амплификация выполняется на стадии обозначенного воспроизведения с использованием запатентованной технологии фермент-амплификации. Визуально положительные пробы окрашиваются в желто-оранжевый цвет.

Интенсивность окраски пропорциональна количеству антигена хламидии. Точный результат исследования определяют с помощью специальных аппаратов для ИФА.

Выделение хламидий в культуре клеток МсСоу. Одним из лучших, но в то же время наиболее трудоемким, является метод диагностики хламидий путем выделения возбудителя в культуре клеток, обработанных различными антиметаболитами («золотой стандарт»).

ПОДРОБНЕЕ ПРО:  Идиопатическая подагра симптомы лечение -

Для этой цели обычно используют чувствительную культуру клеток, обработанную циклогексимидом. Чувствительность культурального метода по сравнению с ПЦР составляет 70-80%, но в то же время он превосходит молекулярно-биологические методы диагностики по специфичности.

Культуральный метод является референс-методом при оценке эффективности антибактериального лечения. При исследовании биопроб методом ПЦР после курса химиотерапии в некоторых случаях можно получить «ложноположительные с клинической точки зрения» результаты.

Методы диагностики хламидиоза

Это связано с тем, что невозможно однозначно оценить жизнеспособность и патогенность микробной клетки на основании выявления фрагмента ее генома, используя только данные молекулярно-биологических методов.

В этом случае при исследовании клинического материала с помощью культурального посева микробные клетки, потерявшие эти важные с клинической точки зрения свойства, не дадут роста в клеточной культуре.

Диагностика методом полимеразой цепной реакции (ПЦР). Экстремально высокие показатели чувствительности и специфичности ПЦР делают эту методику во многом революционной в лабораторной диагностике, но, несмотря на это, особое внимание при его использовании следует уделять, без сомнения, вопросам правильной интерпретации получаемых результатов.

Основными мишенями при выявлении хламидии трахоматис методом ПЦР являются нуклеотидная последовательность видоспецифической криптической плазмиды, последовательность генома главного белка внутренней мембраны, рибосомальные гены.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

С помощью ПЦР-диагностики исследуются биологические образцы, взятые с мужских и женских мочеполовых органов и ищут в них ДНК микроорганизма. На всех стадиях обнаружения хламидиоза способом полимеразной цепной реакции требуется соблюдение стерильности, иначе результаты анализов будут ложноположительными.

При наличии низкой чувствительности для ДНК-диагностики характерна еще и невозможность обнаружения инфекции на начальной стадии ее развития. Дело в том, что иммунная система человека с персистирующим хламидиозом начинает вырабатывать антитела к внутриклеточным микробам только спустя несколько недель после заражения.

Проведение ПРЦ-методики целесообразно только через месяц после инфицирования, когда в слизистых оболочках половых органов уже развивается воспалительный процесс.

Продолжительность диагностики этим методом может варьироваться от суток до нескольких дней в зависимости от загруженности лаборатории и необходимости применения дополнительных способов исследования.

Полимеразная цепная реакция относится к экспериментальным методам молекулярной биологии, позволяющим увеличивать концентрацию ДНК-фрагментов в исследуемом материале.

Наиболее информативными методами ДНК-исследований являются:

  • ДНК-зондирование. Этот способ обнаружения патогенных микроорганизмов относится к высокоспецифичным, но его чувствительность немного меньше, чем у ПЦР. ДНК-зондирование может дать ложноположительные результаты при персистирующем хламидиозе, для которого характерна частая смена ремиссий и рецидивов. Данный клинический метод диагностирования наиболее информативен, когда острый воспалительный процесс развивается в пришеечной области матки. В этом случае чувствительность ДНК-зондирования превосходит культуральное исследование;
  • Лигазная цепная реакция. Наиболее информативная методика выявления хламидий в урине у женщин. Показатели ее чувствительности крайне высоки. Лигазной цепной реакцией можно выявить инфекцию даже на этапе ремиссии. Немаловажное значение имеет и простота сбора биологических образцов, который можно провести в домашних условиях. Не все лаборатории имеют возможность осуществлять исследование из-за трудоемкости используемых методов.

Транскрипционная амплификация относится к новейшим разработкам диагностических мероприятий по выявлению хламидийной инфекции. Для проведения исследования требуется биологический материал, взятый со слизистых оболочек мочеиспускательного канала или влагалища. В нем определяется рибосомная ДНК патогенных внутриклеточных микроорганизмов.

Методы диагностики хламидиоза с помощью реакций иммунофлуоресценции относятся к самым трудоемким способам выявления внутриклеточных микроорганизмов. При их проведении используется сложное оборудование, а квалификация врача должна быть достаточно высокой для обращения с флуоресцентным микроскопом и специальными реактивами. Лабораторный анализ не отличается высокой чувствительностью.

Процедура иммунной флуоресценции не подходит для диагностирования хламидиоза, если его сопровождают другие урогенитальные инфекции. Полученные значения анализа могут быть ложноположительными из-за способности окрашивания применяемыми реактивами:

  • стафилококков;
  • стрептококков;
  • бактерий, принадлежащих к условно-патогенной микрофлоре.

В качестве биологического образца используется мазок из мочеиспускательного канала, на который определенными способами нанесены светоотражающие красящие вещества.

Бактериологический посев

Бак посев на хламидии нередко проводится при малой информативности других методов диагностирования хламидиоза. Культуральный метод практически никогда не дает ложных результатов, поэтому даже на начальной стадии урогенитальной инфекции данным способом выявляются патогенные микроорганизмы.

К недостаткам этой микробиологической диагностики относятся:

  • высокая стоимость питательных сред при этом методе выращивания хламидий;
  • длительность лабораторного исследования — 5-7 дней;
  • наличие дорогостоящего оборудования и высококвалифицированного медицинского персонала.

В качестве биологического материала в диагностике используются эпителиальные клетки, взятые с половых органов с помощью соскабливания. Они вносятся в чашки Петри, наполненные питательной средой, которая необходима для роста и активного размножения хламидий.

После посева образцов создаются благоприятные условия для формирования колоний инфекционных возбудителей. Для этого применяются специальные инкубаторы, оборудованные термостатами.

Спустя несколько дней после начала анализа на поверхности питательной среды образуются колонии микроорганизмов. Для специалистов лабораторий важную роль играют следующие качественные и количественные характеристики колоний:

  • окраска;
  • расположение;
  • количество.

Чем больше сформировалось колоний при бакпосеве, тем выше концентрация хламидий на внутренних стенках мужских и женских половых органов. Использование культурального метода помогает не только выявить наличие инфекционных агентов в биологическом материале, но и определить их резистентность к антибактериальным препаратам.

ПОДРОБНЕЕ ПРО:  Лечение рака народными средствами - 30 рецептов!

Микробиологическая диагностика хламидиоза имеет важное значение при составлении терапевтической схемы. Даже для лечения половых партнеров в зависимости от клинической картины используются различные группы противомикробных средств.

Диагностика хламидиоза при острой и хронической форме

На это оказывает влияние частота применения антибиотиков в терапии респираторных и кишечных инфекций, а также целесообразности их назначения. Хламидию может уничтожить не каждое антибактериальное средство из-за ее внутриклеточного образа жизни.

Экспресс тестирование

Диагностика хламидий может быть проведена и в домашних условиях с помощью экспресс-тестирования. При подозрении на развитии урогенитальных инфекций можно приобрести в аптеке специальные полоски.

Если в моче человека присутствуют патогенные микроорганизмы, то тестовые полоски окрасятся. Основу данного метода диагностики заражения хламидиями составляет иммунная хроматография, более расширенной вариант которой применяется и в лабораторных условиях.

«Предупреждение: Любой вид тестирования хламидиоза в домашних условиях не гарантирует 100% точности и может давать как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты. О такой вероятности развития событий покупателей предупреждают разработчики тест-полосок в приложенной аннотации».

Экспресс-тестирование будет нецелесообразным, если человек проводит диагностику в стадию ремиссии. На данном этапе микробы находятся внутри клеток, поэтому в моче могут отсутствовать и сами хламидии, и токсичные продукты их жизнедеятельности.

При наличии клинических проявлений инфекции необходимо сдать анализы в лабораторию медицинского учреждения. При обследовании пациентов врачом также будут обнаружены косвенные признаки заражения при осмотре.

Основные правила подготовительного этапа

Лабораторная диагностика урогенитального хламидиоза занимает от нескольких дней до недели. Такой широкий временной диапазон зависит от используемой методики, а также от полученных результатов.

Довольно редко возникают ситуации, когда лаборант сомневается в наличии инфекционных возбудителей у конкретного пациента при любом методе диагностики.

В этом случае спустя 10-14 дней проводится дополнительное исследование для постановки окончательного диагноза. Будет использован другой способ выявления хламидий или прежняя клиническая методика с учетом возможных ошибок при сборе биологических образцов.

На стадии предварительной диагностики врач подскажет, где сдать лабораторные анализы. Как правило, эти сложные биохимические исследования проводятся в следующих медицинских учреждениях:

  • в лицензированных частных клиниках;
  • государственные лаборатории.

Специалисты этих учреждений при диагностике хламидиоза гарантируют конфиденциальность и несут ответственность за точность постановки диагнозе. На результаты исследований зависят и от правильной сдачи биологических образцов.

Забором материалов занимаются специалисты в лабораториях. Но при необходимости анализа синовиальной жидкости для обследования требуется помощь квалифицированного медицинского персонала и полная стерильность сустава.

  • Кровь из вены. Сдавайте материал только натощак, откажитесь от завтрака, не пейте воду и не чистите зубы. За двое суток перед исследованием исключите из рациона питания жирные, жареные, насыщенные специями и солью продукты, а также любой вид алкоголя;
  • Моча. В течение двух дней до забора биологического образца откажитесь от половых контактов. При хламидиозе для получения достоверных результатов диагностических исследований подходит только утренняя моча с максимальной концентрацией органических соединений, необходимых для проведения анализов.

В качестве биологического материала в некоторых лабораторных исследованиях на хламидиоз используются выделения, полученные при соскобе из шейки матки, влагалища или мочеиспускательного канала.

Для получения наиболее достоверных результатов врачи рекомендуют пациенткам сдавать образцы в первый день после окончания менструации. У мужчин для выявления патогенных микроорганизмов проводится также исследование семенной жидкости.

За два дня до проведения клинических мероприятий представителям обоего пола следует отказаться от сексуальных контактов. Важную роль на подготовительном этапе к выявлению хламидийной инфекции играет полный отказ от курения на протяжении двух дней.

Как лечить и профилактировать заболевание?

Хламидиозы часто диагностируются у мужчин и женщин, ведущих беспорядочную половую жизнь. Отличной профилактикой урогенитальной патологии станет наличие одного постоянного партнера.

Чтобы выявление инфекционных возбудителей не стало неприятным сюрпризом, следует предпринимать такие предупредительные меры:

  • заниматься сексом только в презервативе;
  • проходить два раза в год полный медицинский осмотр для выявления острых или хронических заболеваний, в том числе венерических.

Если клинические исследования подтвердили наличие хламидий, то необходимо незамедлительно приступать к лечению. Проведение антибактериальной терапии на начальной стадии до хронизации процесса позволит предотвратить распространение инфекции и избежать развития необратимых осложнений.

Больным хламидиозом назначаются антибактериальные препараты широкого спектра действия. Выявление венерической патологии на любой стадии требует использования антибиотиков следующих групп:

  • полусинтетические защищенные пенициллины;
  • макролиды;
  • фторхинолоны.

Если клиническим проявлением инфекции становится снижение сопротивляемости организма, то в терапевтическую схему включаются иммуномодуляторы. При диагнозе хламидиоз применяются местные антибактериальные средства в виде свечей, антисептики, противовоспалительные препараты.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями: